?GFP手電筒用于轉基因研究的熒光標記

GFP手電筒用于哺乳動物轉基因研究的熒光標記

為了確定熒光蛋白在眼睛中的可見性，我們使用了手持便攜式雙熒光手電筒下檢查了轉基因小鼠。32 行中有 27 行（84%）在便攜式GFP手電筒下激發(fā)后顯示出可見熒光（圖 2A）。這些眼睛標記在便攜式長波紫外線燈LUYOR-3280UV下也可見，如前所述，使用無處不在的熒光標記。不同線條之間的熒光強度不同，只有在暗室中激發(fā)后才能看到zui暗的線條，即使沒有激發(fā)，在室內(nèi)光線下也能看到zui亮的線條（圖 2B）。我們還在黑色和刺鼠背景上劃了一些線，以分析色素如何影響熒光眼標記的可視化。色素的存在降低了熒光強度（圖 2B）。盡管如此，即使房間燈打開，在刺鼠和黑色背景中仍然很容易看到高和中 EGFP 和 tdTomato 線。然而，低表達的報告線在有色小鼠中是微弱的，盡管它們在黑暗的房間中仍然可以檢測到。因此，這些記者可用于色素和非色素小鼠。重要的是，我們已經(jīng)將這些品系維持了許多代（某些品系中 > 25 代），并且我們沒有觀察到熒光標記隨著時間的推移而失活。因此，可以從一代到下一代始終如一地跟蹤眼睛標記熒光。

GFP手電筒和RFP手電筒照射效果對比：

鏡頭中表達的各種熒光蛋白可以在手持轉基因熒光手電筒照射下可直接觀察。使用GFP手電筒可以看到五個熒光眼標記，而使用RFP手電筒只能看到 mOrange、tdTomato 和 mPlum。(B) EGFP 和 tdTomato 標記表達在轉基因系 (低、中、高) 之間變化。插圖顯示 EGFP “高”線在無激發(fā)的室內(nèi)光下可見。EGFP“中”和 tdTomato“高”轉基因系也顯示在有色（Agouti，黑色）背景中。請注意，熒光眼標記的可見性在有色背景中會降低。

GFP手電筒：

GFP手電筒又叫熒光蛋白觀察手電筒，英文名：GFP flashlight，GFP torch，GFP手電筒是通過發(fā)出藍光或紫外光激發(fā)動植物體內(nèi)發(fā)熒光蛋白發(fā)光，通過專用的熒光蛋白觀察眼鏡，操作者就能夠直接觀察到綠色熒光蛋白的表達效果，是近幾年才上市的一款便攜式激發(fā)光源，是做轉基因研究不需要熒光顯微鏡就能觀察熒光的方便快捷的工具。

上圖：LUYOR-3280 GFP手電筒

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