如何觀察檢驗熒光微球的熒光？

如何觀察熒光微球的熒光？

檢驗熒光微球是否有熒光，可以用美國路陽LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源來測試，如果是綠色熒光微球，采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的藍色光源照射，佩戴LUV-30A熒光觀察眼鏡觀察。如果是紅色熒光微球，采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的綠色光源照射，佩戴LUV-50A熒光觀察眼鏡觀察。LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源內(nèi)置了12顆大功率led，照射面積大，激發(fā)熒光亮度高，觀察效果好，如果您是科研院所，想試用美國路陽的熒光激發(fā)光源，可以聯(lián)系上海峰志儀器有限公司申請樣機試用。

熒光微球的熒光激發(fā)效果：

上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果

上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果

何為熒光微球(Fluorescent microsphere)？

熒光微球: 熒光微球通常是指形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時能夠發(fā)出熒光的微粒。與純熒光化合物相比，熒光微球具有相對穩(wěn)定的發(fā)光行為和形態(tài)結(jié)構(gòu)。目前，已經(jīng)有能夠制備各種各樣的粒徑從納米級到亞微米級的熒光微球。熒光微球有比較穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)及發(fā)光行為，受溶劑、熱、電、磁等外界條件的影響比純熒光化合物小很多。

綠色熒光微球是用于體外診斷、血流測定、成像，以及流式細胞儀校準的微球。綠色熒光微球填充了高性能的油溶性熒光染料，靈敏度高，穩(wěn)定性高。

熒光微球作為一種特殊的功能微球，由于在單個微球中富集了能夠發(fā)射熒光的有機或無機物質(zhì)，除具有無機物和有機物的性能外，同時在外界能量刺激下還能發(fā)射熒光。熒光微球粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高，微球表面弧度有利于抗原決定簇和抗體結(jié)合位點的暴露面處于佳的反應(yīng)狀態(tài)，因此在眾多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用，如生物化學、生物醫(yī)藥、臨床醫(yī)學、基因分析以及光學儀器等，其中熒光微球在醫(yī)藥、生物方面的應(yīng)用尤為重要。

通過在聚合物微球表面或內(nèi)部引入一種或多種熒光物質(zhì)制備的熒光微球，早被用作校準流式細胞儀和熒光顯微鏡的熒光標準物質(zhì)微球，后逐漸被應(yīng)用到細胞標記、生物分子標記及在活性條件下的示蹤，也可固定蛋白質(zhì)分子等，并跟蹤其功能化過程。

熒光微球能夠攜帶許多熒光分子，較弱的刺激就可以引發(fā)較強的信號，所以只需要少量的低能輻射就能產(chǎn)生熒光信號，避免了使用傳統(tǒng)的放射性微球造成的輻射危險，并在不損失檢測靈敏度的前提下降低了成本。已經(jīng)產(chǎn)業(yè)化的熒光微球，使得高通量免疫分析、藥物篩選、固定化酶等領(lǐng)域的技術(shù)發(fā)展上了一個臺階，熒光微球作為診斷試劑應(yīng)用于免疫分析已是一個必然。熒光微球在生物樣品檢測中作為不同檢測對象的固定化載體，不同熒光微球?qū)?yīng)不同的捕獲抗體，識別不同的抗原，從而實現(xiàn)多種待測抗原定性及定量檢測。我們期待著這一技術(shù)走向成熟和發(fā)展。

熒光微球用于核酸檢測

利用不同顏色的上轉(zhuǎn)發(fā)光材料編碼的微球可用于結(jié)合不同的報告標簽，當結(jié)合上單鏈的DNA之后，熒光強度會顯示不同。利用類似的方法，將上轉(zhuǎn)發(fā)光的納米顆粒包裹在聚苯乙烯的微球內(nèi)部，調(diào)整上轉(zhuǎn)納米顆粒（不同發(fā)射波長）的比例，可以獲得不同的熒光編碼微球。上轉(zhuǎn)發(fā)光編碼微球與報告分子的染料標記沒有光學交叉，因此標記染料到熒光波長可選擇范圍很寬。量子點編碼的微球也可用于結(jié)合目標DNA分子，利用微流控芯片的層流以及外部的磁力，報告分子、清洗劑通過磁力的作用產(chǎn)生了三股流體，利用量子點標記的微球，進行雜交鏈式反應(yīng)之后的信號出現(xiàn)增強的現(xiàn)象，因此量子點編碼的微球可以用于在人的肺癌細胞中進行miRNA的過表達的多重檢測（圖2所示）。

熒光微球用于蛋白質(zhì)檢測

多重顏色的量子點結(jié)合的微球廣泛被證實能夠用于多重抗原的同時檢測，包括IgG，腫瘤標志物，病原標志物等，使用上轉(zhuǎn)換納米顆粒以及攜帶磁性納米納米顆粒標記的微球可以同時檢測兩種不同的抗原?；谖⒘骺丶夹g(shù)，利用AFP （ FEMMs 熒光編碼的磁珠） 對Fe3O4納米顆粒的磁性富集以及分離（高溫化學溶脹的方式），量子點以及Fe3O4納米顆粒與微球的通過高分子鏈端或者疏水作用進行有效的結(jié)合，該技術(shù)也廣泛的應(yīng)用于一些多重生物標志物的檢測。

熒光微球用于細菌檢測

傳統(tǒng)的細菌檢測（例如微量肉湯稀釋法或者E-測試）所需時間周期長，因此需要開發(fā)能夠快速以及高效地對多重細菌進行檢測。Ozcan組利用了聚苯乙烯微球能夠快速對寄生于人角膜以及結(jié)膜的金黃色葡萄球菌進行快速的計數(shù)。Wang課題組將熒光微球與萬古激素（vancomycin）進行孵育，通過氫鍵與細菌細胞壁上的連接酶進行結(jié)合，通過熒光磁珠微球的擴散方式來有效識別溶液中活細菌或者死細菌。

基于POCT平臺的熒光微球的檢測

Im使用智能手機的方式分析免疫微球的衍射圖案，從而不同生化目標的檢測，包括一些可溶解的蛋白、核酸以及細胞水平的蛋白。但是這個技術(shù)非常依賴于手機的攝像頭的分辨率，除此之外，該檢測方式也依賴于不同手機品牌，這些會極大的限制了該技術(shù)達到應(yīng)用以及推廣（如圖a所示）。Ming課題組為了分析微球的熒光信號，整合了一些光學元器件（例如激發(fā)光源、透鏡、光學濾片以及其他的電子元器件）開發(fā)了一套智能手機的檢測設(shè)備。標記了不同顏色量子點的微球被捕獲在玻璃芯片的孔洞中，從而形成了微球陣列芯片用于快速檢測多重抗原物質(zhì)。該方案在文中被用于檢測七種抗原物質(zhì)，利用上轉(zhuǎn)換納米顆粒結(jié)合微球的方式來快速檢測不同種類的霉菌毒素。

上海峰志儀器有限公司銷售的LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源能夠激發(fā)綠色熒光微球、紅色熒光微球的發(fā)出熒光。